近年來，
熒光-PCR法技術(shù)有了重大改進(jìn)。將傳統(tǒng)PCR檢測模式中的PCR擴(kuò)增和檢測相結(jié)合（即在同一個密閉容器中將PCR擴(kuò)增反應(yīng)與熒光標(biāo)記探針檢測結(jié)合在一起）檢測目的核酸的檢驗方法紛紛出臺。這樣的檢測方法稱為“實時”PCR，表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可被實時檢測。準(zhǔn)確地說，“實時”是指在每一個PCR循環(huán)后檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，我們可得到每個樣品的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物變化曲線。通過分析這些反應(yīng)曲線，不但可得到病原體的定性檢測結(jié)果，還可對病原體的數(shù)量進(jìn)行精確定量。
實時熒光-PCR法不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于應(yīng)用了熒光探針，可通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測PCR擴(kuò)增過程中熒光信號的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高準(zhǔn)確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺點。
熒光-PCR法相比較普通PCR模式的優(yōu)勢：
1.由于實時熒光PCR采用封閉的檢測模式，因此擴(kuò)增產(chǎn)物導(dǎo)致污染的可能性比普通PCR要小得多。
2.由于擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測在PCR擴(kuò)增過程中同時進(jìn)行，并且數(shù)據(jù)的采集、分析全部由儀器自動完成，因此整個檢測所需的時間比普通PCR要節(jié)省許多。
3.實時熒光PCR檢測模式功能強(qiáng)大，具備定性、定量、突變、多項目等檢測功能。而普通PCR要完成上述項目需采用不同的技術(shù)平臺。
4.實時熒光PCR進(jìn)行定量檢測時，其定量線性范圍（5-6 logs）比普通PCR（2-3 logs）要寬得多。
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更新時間：2023-01-05
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