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產品名稱 | 登革病毒型PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Dengue Virus(DENV)4RTPCR |
貨號 | LZP6643 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠通道蛋白3(AQP-3)elisa試劑盒Anti-AIFM2 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 神經生物學 信號轉導 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶
小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)elisa試劑盒Anti-AIG1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子
小鼠內脂素/內臟脂肪素(visfatin)elisa試劑盒Anti-AIRE Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 神經生物學 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶 Alzheimer's
小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)elisa試劑盒Anti-AJUBA Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 染色質和核信號 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子
小鼠甲狀旁腺激素(PTH)elisa試劑盒Anti-AK5 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子
小鼠肥大/干細胞生長因子受體(試劑盒/Sl/CD117)elisa試劑盒Anti-AKAP11 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞周期蛋白 激酶和磷酸酶 細胞膜受體 細胞類型標志物
小鼠膽固醇酯轉移蛋白(CETP)elisa試劑盒Anti-AK6 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶
小鼠D-乳酸elisa試劑盒Anti-AKAP1 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 神經生物學 信號轉導 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶
小鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)elisa試劑盒Anti-AKAP14 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子
豚鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)elisa試劑盒Anti-AKAP17A Antibody研究領域 腫瘤 免疫學
山羊超氧化物歧化酶(SOD)elisa試劑盒Anti-AKAP13 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶
人DNA拓撲異構酶1(*)自身抗體elisa試劑盒Anti-AKAP5 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞凋亡
綿羊白介素4(IL-4)elisa試劑盒Anti-AKIP1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 染色質和核信號 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶
雞α干擾素(IFN-α)elisa試劑盒Anti-AKIP1 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 染色質和核信號 信號轉導 轉錄調節因子
大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)elisa試劑盒Anti-AKR1C8P Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 神經生物學 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子
5-降冰片烯-2-羧酸甲酯 三(4-基)膦 溴化基三苯基膦
2-溴-5-硼酸 溴化基三苯基膦 二溴三苯基膦
3--4-硝基 二溴三苯基膦 三(4-嗎啉基)氧化膦(TMPO)
2--3-噻吩 三(4-嗎啉基)氧化膦(TMPO) 烯丙基二苯基膦
Bis(trimethylsilyl)acetylene 二(*基甲硅烷基)乙炔 14630-40-1
1-Hexyne 1-己炔 693-02-7
3-Methyl-1-pentyn-3-ol 3-甲基-1-戊炔-3-醇 77-75-8
Trimethylsilylacetylene *基硅基乙炔 1066-54-2
大鼠載脂蛋白A2(apo-A2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人雄(ASD)免疫試劑盒 Human Androstenedione,ASD ELISA Kit
人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: BP180-Ab ELISA Kit
RatLeukoieneC4,LT-C4ELISA試劑盒大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumangranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒規格:96T/48T
登革病毒型PCR檢測試劑盒說明書小鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒英文名稱:Mouse calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit*
小鼠降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒 英文名稱:Mouse Procalcitonin,PCT ELISA Kit進口/分裝
小鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒 英文名稱:Mouse Collagenase I ELISA Kit進口/分裝
小鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒 英文名稱:Mouse Collagenase Type II ELISA Kit*
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒英文名稱:Human plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit*
人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA試劑盒英文名稱:Human plaet membrane glycoprotein Ⅳ,GP-Ⅳ ELISA Kit進口/原裝
人血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒英文名稱:Human Thrombopoietin,TPO ELISA Kit 進口/分裝
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。