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核型多角體病毒PCR檢測試劑盒價格上海聯祖生物相關產品:PRSS檢測試劑盒如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 核型多角體病毒PCR檢測試劑盒價格 |
英文名稱 | Nuclear Polyhedrosis Virus(NPV)PCR |
貨號 | LZP7077 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Taq plus DNA Polymerase磷酸二鯨蠟酯 98%羥基酪 98%
Pfu DNA Polymerase順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸 分析標準品常春藤皂苷元 分析標準品,≥98%
SP6 RNA Polymerase二溴磷 分析標準品羥基紅花黃色素A 分析標準品,≥98%
T3 RNA Polymerase薯蕷皂素 分析標準品,>95%素 分析標準品,≥98%
T7 RNA Polymerase二甲氧烷 分析標準品,≥99.8% (GC)鹽酸石蒜堿 96%(HPLC)
T4 DNA Polymerase烯酸 N,N-二乙基氨基乙酯 95%鹽酸石蒜堿 分析標準品,≥98%
T7 DNA Polymerase1,3-二羥基酮,二聚體 97%羽扇豆 分析標準品,≥98%
T4 RNA Ligase2,2-二羥基偶氮苯 97%羅漢果苷V 分析標準品,≥98%
T4 DNA Ligase二十二碳六烯酸甲酯 98%羅漢果苷V 98%
TDT二十二碳六烯酸甲酯 分析標準品,98%橄欖苦苷 分析標準品,≥98%(HPLC)
RAPD Primer鄰苯二甲酸二丁酯 分析標準品安石榴苷 98%
Random primers2,4-二氯苯氧乙酸 分析標準品紫丁香苷 分析標準品,≥98%
β-Dextranase2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物細胞培養, ≥98%(GC)野黃芩苷 分析標準品
5′-NT3,3'-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽,合 98%花旗松素 分析標準品,≥98%
X-GlcA2,6-二硝基酚 96%蔓荊子黃素 分析標準品,≥98%(HPLC)
BCIG二戊胺 99%二苯胍 97%
他克莫司NF-M (Neurofilament triplet M) 中分子量神經絲蛋白(抗原)SMARCD3 肌動蛋白依賴染色質調控因子SMARCD3蛋白抗體
他克莫司(標準品)NF-H(Neurofilament triplet H) 高分子量神經絲蛋白(抗原)SMARCA6/HELLS 淋巴特異性解旋酶抗體
枸櫞酸他莫昔芬NIS(Na+/I-symporter;NIS) 鈉碘轉運體蛋白(多肽抗原)SMARCA4/SNF2 beta/BRG1 抑癌基因SNF2β抗體
枸櫞酸他莫昔芬(標準品)NFKBp65(p65 NF-kappa B;p65NFKB) 細胞核因子或稱k基因結合核因子(多肽抗原)SMARCA2/BRM ATP依賴解旋酶SMARCA2抗體
坦度替尼;MLN518NR2A (Glutamate receptor2A) 谷氨酸受體(N端抗原)SMARCA1/SNF2L 解旋酶SNF2L抗體
坦度替尼(標準品)NRP-1(neuropilin-1) 神經纖毛蛋白-1(抗原)SMAGP 小細胞跨膜糖化蛋白抗體
拉寧NRP-2(neuropilin-2) 神經纖毛蛋白-2(抗原)SMAD9 SMAD家族9抗體
替尼泊甙,替尼泊苷NSBP1(Nucleosome-binding protein 1) 核小體結合蛋白1(抗原)Smad7/Smad6 Smad 7抗體
替尼泊甙,替尼泊苷(標準品)NTP,Neurual thread protein 神經絲蛋白(抗原)SMAD5 細胞信號轉導分子SMAD5抗體
富馬酸替諾福韋酯;泰諾福韋酯OAT-1 (Organic anion transporter 1)human 陰離子轉運蛋白-1(人源)Smad4 Smad4抗體
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