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肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒廠家上海聯祖生物相關產品:FEP檢測試劑盒輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Pneumocystis spp.PCR |
貨號 | LZP7154 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Cephalin亞磷酸三苯酯 98%二乙烯苯 55%
TMEDA四氫糠 AR,98.0%乙基苯 >99.5%(GC)
TPT四氫糠 CP乙酸甲酯 ≥99%(GC)
p-Phenylenediamine四氫糠 99%甘氨酸 AR,99.5-100.5%
1,4-Phenylenediamine dihydrochloride四甲基溴化銨 AR三氯蔗糖 98%
Chloramine T trihydrate甲苯二異酸酯 98%()烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作為穩定劑
WSC甲苯二異酸酯 Standard for GC()烯酸叔丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)
EDAC•HC1苯硫酚 99%()1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一碳-7-烯 99%
Phelphthalein mophosphate bis(cyclohexylammonium) salt四甲基溴化銨 離子對色譜級,≥99.0% (AT)N-(3-二甲氨基基)甲基烯酰胺 99%
N-(1-Naphthyl)ethylenediamine四甲基溴化銨 ACS, ≥98.0%1,5-二氮雜雙環[4.3.0]-5-壬烯 98%
PHⅢ乙烷 99%,含銅屑穩定劑烯酸異丁酯 99%
Benzamide三 AR,99.5%雞蛋白蛋白 98%
PEI1-烷 99%1,1-環己基二乙酸酐 98%
4-Methylaniline hydrochloride殼聚糖 脫乙酰度≥95%, ,粘度100-200 mpa.s乙酰酮鋇 Ba ≥30.0 %
Aniline hydrochloride羧化殼聚糖 BR,溶性硫柳汞鈉 AR,98%
Benzidine殼聚糖 低粘度:<200 mPa.s鈉 AR
甘油單油酸酯/單油酸甘油酯Prostate Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgM
ADP.Na2; 5'-二磷酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二磷酸二鈉鹽SSU72 (D3I2D) Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗猴IgM
ADP; 5'-二磷酸腺苷/腺苷-5'-二磷酸Phospho-CaMKK2 (Ser511) AntibodyRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗猴IgM
沙格列汀/沙克列汀TunicamycinRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗猴IgM
更昔洛韋BCAT1 AntibodyRabbit Anti-Mink IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗貂IgG
更昔洛韋(標準品)POLR3A (D5Y2D) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗貂IgG
5,6-二甲基-1-茚酮Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗貂IgG
芍藥苷(標準品)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗貂IgG
芍藥苷(40%)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗貂IgG
芍藥苷(50%)PathScan® Total FGF Receptor 1 Sandwich ELISA KitRabbit Anti-Mink IgG/PE PE標記的兔抗貂IgG
肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒廠家人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人癌標志物-CA153ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃10毫克
人癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
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