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類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒規格上海聯祖生物相關產品:OGP檢測試劑盒 取上清即可檢測,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,但應避免反復凍融DNA氧化損傷的主要產物之一。在復制過程
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產品名稱 | 類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | Plesiomonas shigelloidesPCR |
貨號 | LZP7152 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
EDTA-MgNa2鍺試劑 97%無檸檬酸 CP, ≥99.0% (T)
EDTA-2Na高氯酸 99.99% metals basis檸檬酸,一 Standard for GC
EDTA-2NaCaN-苯甲酸(釩試劑) AR,95%檸檬酸,一 ACS, 99.0-102.0%
Ethylenediaminetetraacetic acid manganese disodium salt hydrateN-苯基鄰釩試劑) 98%檸檬酸鈉,二 AR,99.0%
Disodium zinc ethylenediaminetetraacetate tetrahydrate焦銻酸 AR,99.0%檸檬酸鈉,二 CP,98.0%
Ethylenediaminetetraacetic acid copper(II) disodium salt1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0% 二合檸檬酸鈉 GR
EDTA tetrasodium salt1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 98%檸檬酸鈉,二 ACS, ≥99.0% (NT)
EDTA-2K多乙烯多胺 AR檸檬酸鈉,二 用于分子生物學, ≥99%(GC)
EDTA-3K檸檬酸二氫 AR,98.0%4-甲氧基苯甲酰氯 97%
Lipoteichoic acid氟氫化 AR,99.0%2-甲基-1,3- 99%
Palmitic acid氟氫化 CP,98.0%納米羥基磷灰石 napowder,<100 nm particle size (BET), ≥97%
Citric acidN-苯基硫脲 98%硝酸鐿 99.9% metals basis
Citric acid CP()氟化鐿 99.99% metals basis
α-Ketoglutaric acid黃磷 CP()硝酸鐿 99.99% metals basis
α-Ketoglutaric acid disodium salt哌啶 AR,99.5%()羅丹明6G 高純級,95%
OPD哌啶 CP()安息香 99.5%
糖脂;植物鞘胺TAF1 (D6J8B) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗猴IgG
甲苯磺丁脲XBP-1s (D2C1F) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗猴IgG
甲苯磺丁脲(標準品)Phospho-Progesterone Receptor (Ser345) AntibodyRabbit Anti-Monkey IgG/Cy5 Cy5標記的兔抗猴IgG
奧美拉唑 Human Interleukin-6 Receptor α (hIL-6Rα)Rabbit Anti-Monkey IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗猴IgG
奧美拉唑 (標準品)Human Interleukin-6 Receptor α (hIL-6Rα)Rabbit Anti-Monkey IgG/Bio 生物素標記的兔抗猴IgG
氯唑沙宗CDK4 (D9G3E) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/APC APC標記的兔抗猴IgG
氯唑沙宗(標準品)CDK4 (D9G3E) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗猴IgG
D-氨基葡萄糖鹽酸鹽Glutamate Dehydrogenase 1/2 (D9F7P) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgG
鹽酸氨基葡萄糖(標準品)GLDC AntibodyRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗猴IgG
氟派利多,氟哌利多AFAP1L2/XB130 (D4A5) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗猴IgG
類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒規格人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT25克
人妊皰疹抗體(HG)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:10片/箱
人妊特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人妊相關血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人絨毛膜促性腺激素(HCG)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT20個/包
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。