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呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒廠家上海聯祖生物相關產品:EBv IgG檢測試劑盒避免使用溶血,高血脂樣品樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測
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產品名稱 | 呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Respiratory Syncytial Virus(RSV)RTPCR |
貨號 | LZP7222 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Quinacrine dihydrochloride 對磷酸二鈉 六合物 細胞培養級, ≥98%1H-咪唑-4-甲酸 98%
2-Amifluorene對磷酸二鈉 for enzyme immuassay,≥99.0%三氟磺酸酐 98%
2-Amipyrimid鈉 AR,98.0% 3-溴 98%
5-Nitrouracil磺胺二甲氧嘧啶 98%苯并-15-冠-5 98%
AntipyrineD-(+)-海藻糖 二合物 from Saccharomyces cerevisiae, ≥99%鄰苯二酚-O,O′-二乙酸 97%
Vaselineoil三(羥甲基)甲基甘氨酸 99%1-(3-氨基基)吡咯烷 97%
Vaselineoil三(羥甲基)甲基甘氨酸 99.5%2-苯氧基溴乙烷 98%
Arlacel A3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺 98%氯代異丁烷 98%
Benzil3,3′,5,5′-四甲基聯苯 ≥99%(HPLC)氯代正烷 99%
Chrysene3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺 standard for GC, ≥99.0% (GC)氯代正烷 分析標準品,≥99.8% (GC)
DiphenylacetyleneTris乙磺酸 99%氯代仲丁烷 99%
Euparal三(羥甲基)氨烷鹽酸鹽 99%1-氯代正戊烷 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
IndanN-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-胺鈉鹽 99%1-氯代正戊烷 99%
Indole3,3',5,5'-四甲基聯苯胺鹽酸鹽 98%環戊乙酸 98%
Oleyl alcohol2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸 98%1,4-二氯丁烷 98%
Phthalide三(羥甲基)氨烷 標準緩沖物質, ≥99.9% (titration)2-羥基-4-甲氧基苯甲 98%
金雀花堿,野靛堿A1/Bfl-1 (D1A1C) Rabbit mAbPPAR alpha α型-過氧化酶活化增生受體抗體
金雀花堿,野靛堿(標準品)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (PE Conjugate)PPAPDC3 磷脂酸磷酸酶2結構域3抗體
厄貝沙坦Catalase (D5N7V) Rabbit mAbPPAP2C 磷酸脂磷酸解酶2抗體
5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-胸苷-3'-O-丁二酸MORF4L1/MRG15 (D2Y4J) Rabbit mAbPPAP2A 磷酸脂磷酸解酶1抗體
楊苷IRF-1 (D5E4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PP2CA/PPM1A 蛋白磷酸酶2C亞型α抗體
楊苷(標準品)GIMAP5 AntibodyPP2Ac/PP4C 磷酸酯酶-2Ac抗體
厚樸酚Mo-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAbPP2A beta/PPP2CB 蛋白質磷酸酶2B抗體 PP2A β PP2A-β
厚樸酚(標準品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAbPP2A alpha/beta 蛋白質磷酸酶-2A抗體
埃索美拉唑鎂(三)Di-Methyl Lysine Motif [dme-K] MultiMab™ Rabbit mAb mixPP1C gamma 蛋白磷酸酶γ1抗體
蘆丁/蕓香葉苷PathScan® Total PSA/KLK3 Sandwich ELISA KitPP-1B 蛋白磷酸酯酶-1B抗體
呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒廠家人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人周期素依賴性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8°C25克
人軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克
人軸突生長誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25毫升
人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃25毫升
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。