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鯉春病毒血癥病毒PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:C.albicans檢測試劑盒公司代理的試劑品牌:Amresco、Sigma、Fluka、Alfa、TCI、Merck等進口品牌所有試劑不能與皮膚直接接觸。
產(chǎn)品分類
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產(chǎn)品名稱 | 鯉春病毒血癥病毒PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)RTPCR |
貨號 | LZP7310 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Lithospermic acid4-溴苯甲二乙基縮 99%玉米烯酮 99%
Magloside A1-溴-2,3-二氯苯 98%ALPHA-玉米赤霉烯 97%
Martyside1-溴-2,6-二氯苯 99%乙酰乙酸基烯酸乙酯 95%
Methyl 3-(2,4-dihydroxyphenyl)propionate3-溴-4-氯苯甲 98%己二酸 Standard for GC,≥99.5%(GC)
Methyl 3,4,5-trimethoxycinnamate5-溴-2-氯苯甲酸 98%己二酸 AR,≥99%(HPLC)
Methyl 3-(4-methoxyphenyl)propaate9-(4-溴苯基)咔唑 98% 己二酸 超純級,≥99.5% (HPLC)
Methyl 3-O-feruloylquinate2-溴蒽 97%己二酸 藥用級, 99.6-101.0%
Methyl 4-caffeoylquinate9-溴蒽 96%己二酸 ≥99.6%, FCC
Methyl 4-hydroxycinnamate9-溴菲 98%1,2,4-苯三酸酐 97%
Methyl 5-O-feruloylquinate3-氯-4-氟苯酸 98%雙酚A CP
Methyl cinnamate4-羧基苯酸 97%雙酚A >99.0%(GC)
Methyl (E)-3’-hydroxy-4’-methoxycinnamate2-氯-4-氟苯酸 98%雙酚A 分析標準品,用于藥物分析,>99.8%(HPLC)
Methyl ferulate2-羧基苯酸 97%硫酸鋇 AR
Methyl rosmarinate2-氯-4-茴香酸 95%硫酸鋇 99%,1μm
Methyl salviolate A5-氯-2-氟苯酸 97%1,4-環(huán)己烷二羧酸(cis + trans) 99%
Methyl sinapate2-氯-5-(三氟甲基)苯酸 96%多聚甲 AR,95.0%
重膽堿(>98%,BR)RPA70/RPA1 (4D9) Rat mAbPhospho-HER4 (Tyr1284) 磷酸化HER4抗體
鉻粒(>99%,BR)MRPL11 AntibodyPhospho-HER4 (Tyr1188) 磷酸化HER4抗體
鉻粉(>99%,BR)EtoposidePhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體
氯化鉻六(>98%,BR)Naked1 (C30F10) Rabbit mAbPhospho-HER3(Tyr1328) 磷酸化HER3受體抗體
硫酸鉻十二Naked1 (C30F10) Rabbit mAbPhospho-HER3 (Tyr1289) 磷酸化HER3受體抗體
硫酸鉻(>98%,BR)Caspase-12 AntibodyPhospho-HER3 (Tyr1222) 磷酸化HER3受體抗體
三氧化鉻(>99%,BR)Caspase-12 AntibodyPhospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受體抗體
酸性紅BTCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAbPhospho-HER2(Tyr1248) 磷酸化HER2受體抗體
直接黃12TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAbPhospho-HER2(Tyr1221/1222) 磷酸化HER2受體抗體
肉桂酰胺(>98%,BR)BortezomibPhospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體
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