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豬葡萄球菌PCR檢測試劑盒規格上海聯祖生物相關產品:AnuA-IgG檢測試劑盒完善的實驗技術開發平臺,和成熟的試劑研發系統,并熟練掌握了各種酶聯技術,產品具有較強的穩定性和較高的準確性。
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產品名稱 | 豬葡萄球菌PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | Staphylococcus hyicusPCR |
貨號 | LZP7320 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
8alpha-Hydroxy-alpha-gurjunene3-氯過氧苯甲酸 85%2-溴已酸乙酯 99%
8alpha-Methacryloyloxybalchanin3-甲基-4-甲酸 99%三氯化金溶液 Au 23.5~23.8%
8-Hydroxy-4-cadinen-3-oneN-甲基乙酰胺 99%2-溴丁酸甲酯 97%
9-Epiblumel B烯苯 98%2-溴已酸甲酯 98%
9-Oxo-2,7-bisaboladien-15-oic acid烯基苯基 97%2-溴酸甲酯 97%
9-Oxo-10,11-dehydroageraphorone2-烯氧基四氫吡喃 98%二氯四氨鈀 Pd ≥43.0%
9-Oxoageraphorone2-乙酰芴 98%2-氨基-3-甲基吡啶 95%
9-Oxonerolidol2-氨基芴 98%4-氨基-3-羥基苯甲酸 98%
10(14)-Cadinene-4,5-diol3-乙酰基噻吩 98%4-氨基-3-氟吡啶 97%
11(13)-Dehydroivaxillin2,2'-雙噻吩 98%5-溴-2-氯嘧啶 97%
11,13-Dihydroivalin3-丁基噻吩 98%2-氯-6-氟苯胺 98%
11R,12-Dihydroxyspirovetiv-1(10)-en-2-one2-溴-3-己基噻吩 98%5-(三氟甲基)-2-吡啶 97%
11S,12-Dihydroxyspirovetiv-1(10)-en-2-one2-溴-3-十二烷基噻吩 95%2,3,4,5,6-五氟苯基酸 97%
12-Hydroxyisodrimenin三苯基膦醋酸鈀 Pd 14.2%硫化銨溶液 AR,20% in H2O
13-Hydroxygermacrone1,4-雙(二苯基膦丁烷)二氯化鈀 98%氯鉑酸 六合物 AR,Pt ≥37.5%
13-O-Acetylcorianin雙(乙)氯化鈀(II) Pd 41.0%氯金酸 48~50% Au basis
硬脂酸單甘油酯(>98%,BR)PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAbPhospho-FAK(Tyr576/577) 磷酸化粘著斑激酶抗體
氯化金NUP98 (P671) AntibodyPhospho-FAK(Tyr407) 磷酸化粘著斑激酶抗體
石墨粉(>99%,BR)IQGAP1 Antibodyphospho-FAK(Ser732) 磷酸化粘著斑激酶抗體
硝酸胍(分子生物學級)DRAK2 (33D7) Rabbit mAbphospho-FAK(Ser722) 磷酸化粘著斑激酶抗體
己二(>98%,BR)C/EBPα Antibodyphospho-FADD(Ser194) 磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體
六甲基磷酰三胺(>98%,BR)4E-T Antibodyphospho-FADD(Ser194) 磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體
還原茚三酮二合物(>98%,BR)Thioredoxin 1 Antibody (Mouse/Rat Preferred)Phospho-FADD(Ser191) 磷酸化Fas相關死亡結構域蛋白抗體
(>40%,BC)Aven AntibodyPhospho-Ezrin (Tyr353) 磷酸化埃茲蛋白抗體
中粘度羥基纖維素Phospho-DARPP-32 (Thr75) AntibodyPhospho-Ezrin (Thr567) 磷酸化埃茲蛋白抗體
3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR)DARPP-32 AntibodyPhospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537) 磷酸化雌激素受體α抗體
豬葡萄球菌PCR檢測試劑盒規格小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT,避光5克
小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
小鼠脂蛋白相關磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
小鼠脂聯素(ADP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
小鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
小鼠中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。