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高首鱘虹彩病毒PCR檢測試劑盒規格上海聯祖生物相關產品:AACT檢測試劑盒規格:50管/48樣 測試方法:高效液相色譜法 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 高首鱘虹彩病毒PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | White Sturgeon Iridovirus(WSIV)PCR |
貨號 | LZP7468 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Barbituric acidFmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%甲酸甲酯 95%
Parafuchsin hydrochlorideFmoc-O-磷酸基-L-酪氨酸 98%甲酸甲酯 分析標準品,≥99.8% (GC)
Nitroso R saltFmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%甲酸甲酯 99%,光譜純
DithizoneFMOC-L-纈氨酸五氟苯酯 98.0%甲酸甲酯 99%
CurcuminFMOC-L-苯氨酸五氟苯酯 96%結晶四氯化錫 99.995% metals basis
Fast Violet B SaltN-甲酰-DL-色氨酸 98%2-甲氧基萘 98%
4-Dimethylamibenzal rhodanineN-Fmoc-N'-Boc-L-2,3-二氨基酸 97%2-氨基-1,3- 98%
DNSClFmoc-D-3-(1-萘基)氨酸 ≥98.5%絲氨鹽酸鹽 98%
1-NaphthylamineFmoc-3-(1-萘基)-L-氨酸 98%2,6-二氯-4-氨基苯酚 98%
Nuclear fast redFmoc-3-(2-萘基)-D-氨酸 98%鄰氨基苯酚 98%
Chrome Blue KFmoc-3-(2-萘基)-L-氨酸 98%3-氨基-4-羥基苯甲酸 97%
Ammonium metavanadateFMOC-D-3-(3-吡啶基)-氨酸 98%鄰氨基對叔丁基酚 98%
1,8-ANSFmoc-L-瓜氨酸 98%苯甲酰 98%
DMTDFmoc-3-L-氨基丁酸 98%2-(溴甲基)萘 98%
Oracet blue B(3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊酸 96% 2,5-二苯基噁唑 99%, 閃爍級
Calconcarboxylic acidFmoc-L-β-谷氨酸-5-叔丁基酯 98%2,6-二氯-4-酚 98%
四甲基硫酸氫銨(離子色譜級,≥99.0%(T))α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Cy5 Cy5標記的小鼠抗牛IgG
三乙胺(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))Drosha (D30F3) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Cy3 Cy3標記的小鼠抗牛IgG
四乙基溴化銨(離子對色譜級)MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Mouse Anti-Bov IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗牛IgG
四丁基化銨(離子對色譜級)eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/APC APC標記的小鼠抗牛IgG
三辛胺(離子對試劑)eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗牛IgG
甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))eIF3H (D9C1) XP® Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗牛IgG
1-己烷磺酸鈉(離子對色譜級,>98.0%(T))HIF-1β/ARNT (C15A11) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的小鼠抗牛IgG
高氯酸鈉,無(for HPLC,99.0%)Acetyl-Histone H2B (Lys20) (D7O9W) Rabbit mAbMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗牛IgG
四甲基溴化銨(離子對色譜級,≥99.0%(AT))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的小鼠抗牛IgG
三溴(光譜級,>99.0%(GC))Atg3 AntibodyMouse Anti-Bov IgG 小鼠抗牛IgG
高首鱘虹彩病毒PCR檢測試劑盒規格肝細胞粘附分子抗體ent-16β,17-Dihydroxykauran-19-oic acid中文名:別名:分子式:C20H32O4
禽流感H5亞型全病毒抗體9-Hydroxy-13E-labden-15-oic acid中文名:別名:分子式:C20H34O3
17-β-羥脫氫酶6抗體Scutebata G中文名:別名:分子式:C40H419
組胺受體H2抗體Carsol中文名:鼠尾草酚別名:Picrosalvin分子式:C20H26O4
同源盒蛋白HOXA11抗體Bonducellpin C中文名:別名:分子式:C23H32O7